PRÁCTICAS DE LABORATORIO

                           IES ALQUIPIR

       
                     

 Extracción de ADN (hojas de vegetales)

FUNDAMENTO:

 1º.-  En primer lugar debemos romper  la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula.  Después debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Para ello se utilizan  jabones  como lavavajillas que  emulsionan los lípidos de las membranas celulares y las rompen. 

2º.- Añadiremos  sal porque separa  las proteínas del ADN y zumo de piña que contiene papaína (se trata de un enzima que las digiere)

3º.- Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares.

MATERIAL:

1.- Hojas de vegetales 

2.- Agua destilada 

3.- Sal de mesa 

4.- Detergente lavavajillas

5.- Alcohol de 96 º muy frío 

6.- Zumo de piña

7.-. Tubo de ensayo

8.- Batidora y un cuchillo.

9.- Vaso de precipitado

10.-Probeta o pipeta 

PROCEDIMIENTO:

 1.- En el vaso de precipitado pequeño echa 25 ml de agua y 3 cucharaditas de detergente lavavajillas.

 2.- Añade una cucharada de sal. 

 3.- Añade 3ml de papaína y tritura todo durante 5 minutos 

 4.- Cuela el triturado con un colador y después filtra en un embudo con papel de filtro

5.-  Retira 5 ml. de la mezcla a un tubo de ensayo y añade con la pipeta 5 mililitros de alcohol enfriado a 0º C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del tubo de ensayo, teniendo éste inclinado. El alcohol quedará flotando sobre la mezcla. 

6.- Deja reposar durante 5 minutos hasta que se forme una zona turbia entre las 2 capas. (Mientras esperas este tiempo, puedes ir recogiendo y limpiando todos los recipientes empleados anteriormente).

 7.- Vas a obtener un  producto filamentoso en  la extracción de ADN . Pero en realidad  no es ADN puro, ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Para hacerlo de forma correcta ahora deberíamos añadir un producto que separara ambas moléculas pero para un alumno de Secundaria es así suficiente.

 

Estudio de una célula de origen animal

1. Observa la morfología externa del huevo de gallina, apreciando que tiene una parte más puntiaguda que otra y que su superficie es rugosa.

2. Con la punta de las tijeras y con mucho cuidado introduce las pinzas, tratando de no romper las membranas internas, y ve retirando la cáscara para abrir un pequeño orificio.

3. Coloca un trozo de cáscara debajo de la lupa y observa los diminutos poros que posee y que permiten la aireación del embrión

4. Observa también que la cáscara está formada a su vez por dos capas de diferente tonalidad.

5. Coloca un trozo de cáscara sobre el portaobjetos y añade unas gotas de HCl, observa lo que ocurre. CaCO3 + 2 HCl → CaCl2 + CO2 + H2O

6. Rompe con cuidado las membranas y extrae con ayuda de una jeringuilla la clara del huevo sin romper la yema

7. A través del agujero realizado saca con cuidado la yema, y colócala sobre una placa Petri. Observa en la superficie un área redonda, pequeña y blanquecina que corresponde al disco germinativo. Rodeando toda la yema se encuentra la membrana vitelínica, rómpela con las pinzas para observar cómo se liberan los compuestos que forman el vitelo.

8. Fíjate en las membranas del interior de la cáscara y observa que forman una cámara de aire en la parte menos puntiaguda.

9.  Por último coloca en una gradilla 4 tubos de ensayo, introduce en los dos primeros 2ml de clara de huevo y en los dos segundos 2ml de yema de huevo, etiqueta los tubos. A continuación realiza la tinción de Sudán en un tubo con yema y en otro con clara, y la reacción de Biuret en el otro tubo con yema y en el otro de la clara.

10. Dibuja lo que has observado y anota tus observaciones: